ELISA是以免疫學反應爲基礎,将抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是将酶标記在抗體/抗原分子上,形成酶标抗體/酶标抗原,稱(chēng)爲酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應後,作用於(yú)底物使之呈色,根據顔色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。
ELISA法是免疫酶技術的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反應闆(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應後都要反複洗滌(dí),這既保證瞭(le)反應的定量關系,也避免瞭(le)末反應的遊離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中,酶促反應隻進行一次,而抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。
目前常用的幾種ELISA方法有:測(cè)定抗體的間接法,測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競争法等。本實驗採(cǎi)用間接法測(cè)定單克隆抗體效價。其主要過程爲:首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應闆的凹孔内,加待測(cè)抗體,保溫後洗滌以除去未結合的雜蛋白質,加酶标抗抗體,保溫後洗滌,加底物保溫30分鍾後,加酸或堿終止酶促反應,用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。
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