絞股藍總皂苷對非酒精性脂肪肝大鼠 Treg/Th17 免疫功能的影響 阮丹,雷婧(杭州市第三人民醫院,杭州 310000) 摘要:目的 研究絞股藍總皂苷對非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝髒保護作用及免疫調節作用機制。方法 48 隻 SD 大鼠随機分爲正常對照組,模型對照組,多烯磷脂酰膽堿膠囊組(陽性對照組,150 mg·kg1)及絞股藍總皂苷高、中、低(240,120,60 mg·kg-1)劑量組,除正常對照組外,其餘各組連續飼喂高脂飼料 10 周,制備NAFLD 模型;模型成功後,各組連續給藥 8 周。實驗期間,分别於(yú)給藥 0,4,8 周眼眶取血檢測血清 AST、ALT;末次給藥後,採(cǎi)用流式細胞技術檢測外周血 Th17 和 Treg 細胞含量;酶聯免疫法檢測血清 IL-17、IL-10 及 TNF-α 含量。HE染色檢查肝組織病理變化和免疫組化法檢查肝組織 IL-17 和 Foxp3 表達。結果 給藥 4 周,絞股藍總皂苷高劑量顯著降低大鼠血清 ALT、AST(P<0.01);給藥 8 周,絞股藍總皂苷各劑量均能顯著降低血清 ALT、AST(P<0.05,0.01)。絞股藍總皂苷高、中劑量能改善肝組織病變,降低 TNF-α 水平;高劑量顯著降低 IL-17、升高 IL-10 水平(P<0.05,0.01),降低淋巴細胞 IL-17 含量,升高 CD4+CD25+Treg 含量(P<0.05),明顯減少炎症因子 IL-17 的表達和增加 Foxp3 表達。 結論 絞股藍總皂苷能改善 NAFLD 大鼠肝髒病變,其作用機制可能與調節肝髒 Treg/Th17 細胞平衡,減少促炎症因子和增加抗炎因子産生相關。 關鍵詞:絞股藍總皂苷;非酒精性脂肪肝;Treg/Th17 細胞;炎症因子 中圖分類号:R965.2 文獻标志碼:B 文章編号:1007-7693(2017)12-1683-06 非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所緻的,以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變爲主要特征的臨床病理綜合征,是脂肪肝主要類型。NAFLD 在我國患病率高達 15%[1];範圍的患病率高達 12.9~46%[2]。NAFLD 的發生發展是一個多因素作用的複雜過程,除涉及脂質過氧化、線粒體功能障礙、炎性反應因子失平衡、天然免疫等外,NAFLD 發病過程還存在免疫功能失衡,表現爲調節性 T 細胞(Treg)和輔助性 T 細胞 17(Th17)數目和功能的異常[3-4]。 絞股藍總皂苷是絞股藍 (Gynostemma pentaphyllum)主要有效成分群,含有 80 餘種達瑪烷型四環三萜類人參皂苷類成分。絞股藍總皂苷具有降脂保肝、降血糖、降血壓、增強免疫力等藥理作用[5-6]。研究發現,絞股藍總皂苷能夠調節機體 T 淋巴細胞亞群失調[7];抑制 NAFLD 肝病大鼠肝髒脂肪變[8]。然而絞股藍總皂苷是否可通過免疫調節防治 NAFLD 及具體機制並不清楚。本實驗採用高脂飼料誘導 NAFLD 大鼠模型,探讨絞股藍總皂苷通過影響 Treg/Th17 細胞免疫功能,並從調節促/抗炎因子平衡途徑研究其防治 NAFLD 的作用機制。 1 動物與試劑 1.1 動物及其飼料 48 隻清潔級 SD 大鼠,♂,體質量 180~220 g,許可證号 SCXK(浙)20080033,由浙江省醫學科學 院動物中心提供。高脂飼料含普通飼料 75%、豬油 12%、膽固醇 2%、膽鹽 1%、蛋黃粉 10%,購 於南通特洛菲飼料科技有限公司,批号爲TP28708U。 1.2 藥物 絞股藍總皂苷(南京澤朗醫藥科技有限公司,批号:ZL20160321RJ,含量:80%)。多烯磷脂酰膽堿膠囊(賽諾菲,批号:4JD036,規格:每粒228 mg)。 1.3 試劑 CD4-FITC(貨号:11-0040-81)、CD25-PE(貨号:12-0390-80)及 IL-17-PE(貨号:12-7177-81)流式試劑均購於 eBioscience 公司。白細胞介素 10(IL-10,批号:20161030)、白細胞介素 17(IL-17,批号:20161015) 及腫瘤壞死因子 -α(TNF-α ,批号:20160928)酶聯免疫試劑盒購於上海恒遠生物科技有限公司。IL-17(抗兔,貨号:ab91649)和 Foxp3(抗小鼠,貨号:ab22510)購於 abcam 科技有限公司。丙氨酸氨基轉移酶(ALT,批号:16092401)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST,批号:16092401)試劑盒均購於甯波美康生物科技股份有限公司。蘇木素-伊紅染液(H&E,南京建成科技有限公司,批号:20160806)。 ......想要閱讀(dú)文獻全文,可點(diǎn)擊下載或者前來咨詢我司業務員!年底“積分兌豪禮”活動(dòng)正在火熱進行中,歡迎新老客戶前來兌(duì)換! |