Elisa試劑盒競争法操作步驟

Elisa試劑盒競争法操作步驟
　　在競争法ELISA中，陰性孔呈色深於(yú)陽性孔。陰性呈色的強度取決於(yú)反應中酶結合物的濃度和加入競争抑制物的量，一般調(diào)節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應zui爲敏感。 
　　競争法ELISA不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨别弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測(cè)定，讀(dú)出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
　　a. 陽(yáng)性判定值法
　　與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計算公式中引入陽性對(duì)照A值，現舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒爲例。試劑盒中的陰性對(duì)照爲不含抗HBc的複鈣人血漿，陽性對(duì)照中抗HBc含量爲125±100u/ml。每次試驗設2個陽性對(duì)照和3個陰性對(duì)照。測(cè)得A值後，先計算陰性對(duì)照A值的平均值（NCX）和陽性對(duì)照A值的平均數（PCX），兩個平均數的差（N-P）必須大於(yú)一個特定的數值（例如0.300）,試驗才有效。3個陰性對(duì)照A值均應小於(yú)2.000，而且應≥0.5×NCX並(bìng)≤1.5×NCX，如其中之一超出此範(fàn)圍，則棄去，而以另2個陰性對(duì)照重新計算×NCX；如有2個陰性對(duì)照A超出以上範(fàn)圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：
　　陰(yīn)性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
　　标本A值≤陽(yáng)性判定值的反應爲(wèi)陽(yáng)性，A＞陽(yáng)性判定值的反應爲(wèi)陰性。
　　b. 抑制率法
　　抑制率表示标本在競争結合中标本對(duì)陰性反應顯色的抑制程度，按下式計(jì)算：
　　抑制率（%）= （陰(yīn)性對(duì)照A值-标本A值）×100%/陰(yīn)性對(duì)照A值
　　一般規(guī)定抑制率≥50%爲(wèi)陽性，＜50%爲(wèi)陰性。

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