人白介素-18結合蛋白（IL-18BP）ELISA試劑盒

人白介素-18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒原理

本實驗採(cǎi)用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-18BP 單抗包被於(yú)酶标闆上，标準品和樣品中的 IL-18BP與單抗結合，加入生物素化的抗人IL-18BP，形成免疫複合物連接在闆上，辣根過氧化物酶标記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，zui後加終止液硫酸，在450nm處測OD值，IL-18BP濃度與OD值成正比，可通過繪制标準曲線求出标本中IL-18BP濃度
。

試劑盒組成（2-8℃保存）

人白介素-18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒準備試劑與收集血樣

1.          收集标本
：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反複凍融。血清、血漿、細胞培養上清至少作1：5稀釋（取50ul，加标本稀釋液200ul,稀釋5倍）。

2.          标準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設标準管8管，每管加入标本稀釋液300ul。在*管中加入4000pg/ml的标準品溶液300ul混勻後用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反複作對(duì)倍稀釋，從(cóng)第七管中吸出300ul棄去。第八管爲空白對(duì)照。

3.          10×标本稀釋液用蒸餾(liú)水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃(nóng)稀釋液+9ml蒸餾(liú)水）。

4.         洗滌(dí)液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃(nóng)縮洗滌(dí)液加入19ml的重蒸水）

人白介素-18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒檢測程序

1.          加樣：每孔各加入标準品或待測(cè)樣品100ul，将反應闆充分混勻後(hòu)置37℃120分鍾。

2.          洗闆：用洗滌(dí)液将反應闆充分洗滌(dí)4-6次，向濾紙上印幹(gàn)。

3.          每孔中加入*抗體(tǐ)工作液100ul。将反應闆充分混勻後(hòu)置37℃60分鍾。

4.          洗闆(bǎn)：同前。

5.          每孔加酶标抗體(tǐ)工作液100ul。将反應(yīng)闆置37℃30分鍾。

6.          洗闆(bǎn)：同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鍾。

8.          每孔加入100ul終(zhōng)止液混勻(yún)。

9.          30分鍾内用酶标儀在450nm處(chù)測(cè)吸光值。

結果計算與判斷

1.          所有OD值都應減除空白值後(hòu)再行計(jì)算。

2.          以标準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上作圖，畫(huà)出标準曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該(gāi)曲線圖上查出相應IL-18BP含量，再乘上稀釋倍數即可。

人白介素-18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒性能

             1.   靈敏度：zui小的IL-18BP 檢測(cè)濃度小於(yú)15pg/ml。

2.        特異性：可同時檢(jiǎn)測(cè)重組或天然的人IL-18BP。不與人其它細胞因子有交叉反應。

3.        重複性：闆内、闆見變(biàn)異系數均小於(yú)10.2％。

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