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羅丹明123染色步驟解析

  • 發布日期:2015-07-21      浏覽次數:16389
    • 上海恒遠生物供應的熒光染料羅丹明123(Rh123)是一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。Rh123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體内聚集,並發出黃綠色熒光。Rh123用於對許多種細胞進行染色,包括植物細胞和細菌。由於細胞内ATP的量與Rh123的熒光強度之間有相關性,此熒光染料被應用於檢測細胞内的ATP。Rh123還用於癌症研究。

      Rhodamine 123 染色
      中文名稱:羅丹明 123
      目    的:測細胞内線粒體的跨膜電位
      EX/EM:  505/534
      染液配制: 羅丹明123 粉劑用甲醇配制成1mg/ml的儲備液,100ul/支分裝,-20℃保存。染色時用Dulbecco’s PBS緩沖液将其稀釋爲5ug/ml。
       說明:激光染料,生物染色。

      别名:;2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-

      yl)benzoic acid methyl ester

      外觀:紅色至棕色粉末溶解性:溶於(yú)水。溶於(yú)乙醇,參(cān)考濃度1mg/ml。

      英文名:Rhodamine

      是一種熒光染

      說(shuō)明:激光染料,生物染色。

      别名:;2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-

      yl)benzoic acid methyl ester

      外觀:紅色至棕色粉末

      溶解性:溶於(yú)水。溶於(yú)乙醇,參(cān)考濃度1mg/ml。

      英文名:Rhodamine

      是一種熒光染料 ,鄰(lín)苯二酚類(lèi)料,鄰(lín)苯二酚類(lèi)

      染色步驟:
      培養細胞

      Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2~3次(緩沖液預熱至室溫或37℃) 

      Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小時

      Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2~3次 

      加0.5ml Dulbecco’s PBS,上機測量

      Fluo-3-AM 染色 (測細胞内遊離鈣離子濃度)
      原理:
      AM酯的羧酸經修改不帶電荷,易浸入細胞。一旦進入細胞,親脂性集團被非特異酯酶切斷,使其帶電荷,從而溢出細胞大大減慢。一般,酯化集團水解對於結合靶離子是必須的。AM酯水解顯顔色或熒光的特點可用於檢查其自發水解。

      保存:
      指示劑幹燥避光4℃或-20℃可長期保存 。
      AM酯易水解,發貨瓶中至少可放六個月。
      用時AM應溶解於無水DMSO,並盡快使用(一周内),否則細胞運載能力下降。AM的DMSO儲備液應避光、冷凍、幹燥保存。鹽的儲備液應用蒸餾水或緩沖液制備,冷凍-20℃避光保存,可放6個月。
      應用:
      用細胞浸透AM酯運載技術:
      1.在生理緩沖媒介中将DMSO稀釋至1-5μM。不可用含胺的緩沖液如Tris。
      2.有機陰離子轉運抑制劑苯甲酸(1-2.5mM)或sulfinpyrazone(0.1-0.25mM)可加入細胞外液以減少指示劑去酯後的滲漏。苯甲酸和sulfinpyrazone是很堿性的,所以之後要重調pH值。
      3.AM酯孵育細胞一般在20-37℃,15-60分鍾,準確的濃度,時間和溫度靠經驗摸索。AM酯運載技術有一個内在問題即亞細胞隔閡,降低孵育溫度可以減輕這一副作用。
      4.檢測熒光前,建議細胞在無指示劑媒介中(有陰離子轉運抑制劑)洗,以去掉細胞表面的非特異吸附的染料。而後再孵育30分鍾來進一步使細胞内AM酯*脫掉。熒光素洩漏引起的背景高可以在實驗前在細胞外加入抗熒光素抗體來防止。
      目    的:測細胞内遊離鈣離子濃度
      EX/EM:探針在細胞外液無熒光,進入細胞後zui大激發波長和發射波長爲464/526

      方法一:
      染液配制:Fluo-3-AM 50ug溶於45ul DMSO(Fluo-3-AM濃度 1mM),15ul/支分裝,-20℃保存。染色時用15~50mM HEPES緩沖液将其稀釋爲1~20uM(如1.5ml 爲10uM)。
      染色步驟:
      培養細胞

      緩沖液漂洗2~3次 

      Fluo-3-AM (1~20uM) 37℃或室溫孵育0.5~1小時

      緩沖液漂洗2~3次 

      加0.5ml 緩沖液,上機測量

      上海恒遠供應産品參數:羅丹明123 1 WinID:0UNV 中文名稱(chēng):羅丹明123 英文名稱(chēng):Rhodamine 123 别名名稱(chēng):2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester