很多小夥伴買到血清的時候會出現沉澱現象,什麽是沉澱呢?沉澱會影響使用嗎?沉澱和血清質量有關嗎?該如何處(chù)理沉澱呢?接下來和小編(biān)一探究竟吧!
1.什麽是血清沉澱?
血清中經常會出現肉眼可見的沉澱,其成分有多種類型,産生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。
① 纖(xiān)維(wéi)蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見的沉澱物大多屬於(yú)這一類型。由於(yú)在生産過程中,血清採(cǎi)集、過濾(3 次 0.1 μm過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處於(yú)溶解狀态。但在解凍之後, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集,形成肉眼可見的沉澱。
② 磷酸鈣(gài)(Calcium Phosphate)
這是一種常見的沉澱成分,通常會造成血清出現雲霧狀渾濁。當産(chǎn)品在 37℃保存時,這種現象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處(chù)遊動,常被誤認爲是微生物污染。
③ 其他成分(Other)血清中的其他成分也會形成沉澱(diàn),例如膽(dǎn)固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉澱(diàn)等
2.血清沉澱會影響細胞培養嗎?
① 細胞生長
我們在出廠前都會對血清進行一系列質檢測試,確(què)保血清質量達到嚴格标準。血清測試和細胞培養經驗也表明,其沉澱成分不會影響血清作爲細胞培養添加物的表現。這一點得到瞭(le)衆多客戶和其他血清供應商的肯定。解凍之後, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集,形成肉眼可見的沉澱。
② 懷疑污染
磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物污染而引發不必要的擔憂。一般情況下,當操作人員融化血清後注意到有霧狀渾濁時,常将其存放在 4℃冰箱中觀察,並(bìng)考慮接下來是否繼續使用。但這樣會使沉澱進一步增多,反而會使血清更加渾濁,進而誤以爲存在血清污染。並(bìng)且,在倒置顯微鏡下,可在血清中觀察到四處(chù)遊動的小黑點(磷酸鈣顆粒的布朗運動),更容易使人誤以爲存在微生物污染。
爲防止這類誤解的産生,我們不建議客戶培養血清來驗證是否存在污染,而是将血清直接接種在細菌培養基上進行培養,以觀察是否有細菌的增殖。並(bìng)且,進行革蘭氏染色,並(bìng)在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確(què)認是否存在微生物污染。
3.怎樣操作可以盡(jǐn)量避免沉澱(diàn)出現?
① 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變(biàn)的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易産(chǎn)生沉澱物。
② 解凍血清時,請随時将之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉澱的發生
③ 請勿将血清置於37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
④ 血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
⑤ 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的原則,並(bìng)且随時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉澱物的增多。 血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現,該如何處理? 欲去除這些絮狀沉澱物,可以将血清分裝至無菌離心管内,以400g稍微離心,上清液即可接著(zhe)加入培養基内一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉澱物,因爲它可能會阻塞過濾膜。
4.出現血清沉澱(diàn)該如何處(chù)理?
我們建議您採(cǎi)用2000 rpm 離心5分鍾,取上清使用就好,比過濾方便,不需要另外準備(bèi)濾心和針筒,又不容易污染。
5.總 結:
血清産(chǎn)品中出現沉澱屬於(yú)常見現象,但不會影響血清的品質,對細胞培養而言也是沒有任何問題的,大家可以放心使用!
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