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開學*課:酶聯免疫試驗驗證方法分析

  • 發布日期:2016-09-06      浏覽次數:3517
    • 目前酶聯免疫法檢測(cè)用試劑盒種類繁多 ,有國外進口的 ,有國内自行研制生産的,如何在衆多的品牌中選擇既能滿足檢測(cè)要求又價格低廉的試劑盒是一個問題。本人根據使用這些試劑盒,在實際檢測(cè)中發現,一般在試劑盒說明書中列出以下指标:zui低檢測(cè)限;回收率;交叉反應率;标準曲線圖譜及數據,标準曲線至少由5個濃度組成;IC50測(cè)定值及變(biàn)形曲線點數目的是比較規範的試劑盒,可以選擇。以下就針對酶聯免疫試驗進行驗證的幾個方法解析,歡迎閱讀分享。

      在使用酶聯免疫法檢測樣品時,應對方法進行驗證。主要測定以下内容 :
      1 标準曲線的測定,标準曲線至少由5個濃度組成,測定次數不少於5次,以確定工作濃度範圍和IC50範圍。一般臨界值爲IC50附近,檢測靈敏度高。
      2 樣品檢測限的測定。
      3 樣品添加回收實驗。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限,對於有zui高殘留*(MRL)的藥物,可添加MRL和MRL上下各一個濃度。
      準確度:若回收率大於40%符合相應檢測标準的要求。精密度:批内變異系數每批平行樣之間的變異系數小於或等於25%,對於禁用藥物小於或等於30%。批間變異系數所有樣品間變異系數小於或等於30%,對於禁用藥物小於或等於40%。
      滿足以上準確度和精密度要求,說明酶聯免疫方法可行,可用來檢測藥物殘留。
      4 對於可用於多殘留檢測的試劑盒,以交叉反應率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。
      5 實際檢測樣品時要包括以下實驗:至少做兩條标準曲線,兩個陰性對照品,兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品,兩個平行的待檢樣品。檢測結果出來後通過标準曲線形狀(符合檢測要求爲S形),IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率,樣品平行情況可確定檢測是否可信。

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